青島SPE小柱公司彪仕奇：固相萃取技術(shù)在體內(nèi)藥物分析中的應(yīng)用
近年來,由于高效液相色譜,特別是反相高效液相色譜的成功應(yīng)用,人們利用色譜理論,采用裝有不同填料的小柱進行樣本制備的固相萃取(亦稱液2固萃取)技術(shù)( SPE)日益受到重視。因此，青島SPE小柱公司彪仕奇認為，充分學習固相萃取基本原理、填料種類和自動化操作等，可以更好的幫助我們進行藥物分析。
一、SPE基本原理
首先，上海SPE小柱公司彪仕奇先說一下SPE的基本原理。將不同的填料作為固定相裝入微型小柱,當含有藥物的生物樣品溶液通過時,由于受到“吸附”或“分配”或“離子交換”或其它親和力作用,藥物或雜質(zhì)被保留在固定相上,用適當?shù)娜軇┫闯s質(zhì),再用適當溶劑洗脫藥物。
洗脫方式有兩種:
一種是藥物比雜質(zhì)與固定相之間的親和力更強,因而被保留,然后用一種對藥物親和力更強的溶劑洗脫;
另一種是雜質(zhì)較藥物與固定相之間親和力更強,則藥物被直接洗脫。通常使用的是前一種模式。
二、SPE填料種類及萃取機制
SPE技術(shù)的核心是填料,填料種類繁多,可分成親脂型、親水型和離子交換型3類。根據(jù)所采用固相萃取劑的種類,可將固相萃取法分為3類:正相、反相和離子交換固相萃取。在生物藥物分析中,常用的是反相和離子交換固相萃取。固相萃取的作用機制主要包括非極性作用(色散作用) 、極性作用(氫鍵作用、偶極矩和誘導偶極作用等) 、離子作用和共價作用等。目前隨著新固相萃取劑的應(yīng)用,由于可以綜合應(yīng)用多種作用機制,從而提高了各種固相萃取方法的應(yīng)用范圍。
三、SPE技術(shù)的進展
SPE技術(shù)固有的優(yōu)勢使其在生物樣本分析中有著越來越廣泛的應(yīng)用,關(guān)于其新型固定相萃取劑和自動化操作設(shè)備的研究與應(yīng)用方面的新進展。
1.新型固相萃取劑
擴大萃取劑的適用范圍,即提高固相萃取的通用性。因此,將極性、非極性基團、離子(陰、陽)交換基團或高分。
固相萃取的填料更具有選擇性。苯基硼酸( PBA)鍵合相硅膠被用于選擇性地萃取血漿中的一系列β2拮抗劑。其作用機理在于藥物與填料以共價鍵結(jié)合,較為專屬地保留該類含醇羥基的藥物。
2.SPE自動化操作
眾所周知,體內(nèi)藥物分析中的樣品量相當大,這就決定了如果不設(shè)法實現(xiàn)自動化,大量的重復操作不可避免的由人工完成,這個過程是繁雜、費時而又耗費人力的。因此,即使是SPE這種單個操作相對省時的前處理技術(shù),大力開發(fā)其自動化技術(shù),也是十分必要的。
早期的自動化固相萃取系統(tǒng)是逐個連續(xù)進樣的,當一個樣品完成洗脫過程后,另一個樣品才可以進樣,耗時較長。進入上世紀90年代以后,自動化的平行操作固相系統(tǒng)得到了推廣。使用這樣的裝置,固相萃取的速度遠遠超過了人工操作。自動化程度高、可與HPLC或LC2MS聯(lián)用,從而實現(xiàn)樣品在線預(yù)處理的特點使得固相萃取技術(shù)在組合化學、藥物篩選等高通量領(lǐng)域得以廣泛應(yīng)用。
四、SPE在體內(nèi)藥物分析中的應(yīng)用
隨著技術(shù)的日益完善,固相萃取以其高效、萃取率高、作簡便等優(yōu)點在體內(nèi)藥物分析中應(yīng)用不斷增多,豐富了生物樣品預(yù)處理的方法。SPE與液一液萃取相比,操作簡單,耗時短,節(jié)省試劑,無污染,因此,很多分析工作者嘗試采用這種方法,獲得了良好的效果。
1、測定人血漿中地賽米松濃度時,使用Oasis HLB C18固相萃取小柱預(yù)處理血漿樣品,簡便、快速,只需要經(jīng)過簡單的固相萃取,每一樣品的分析時間只需9分鐘,并且節(jié)省試劑,回收率高,符合臨床上對人血漿中的地賽米松的濃度測定要求。
2、血漿中皮質(zhì)醇研究時,沒有采用國內(nèi)普遍應(yīng)用的二氯甲烷提取標本,放射免疫法測定含量的方法,由于工作人員接觸有毒試劑,同位素也會污染環(huán)境,而且只能單一測一種物質(zhì),改用固相萃取技術(shù),應(yīng)用高效液相色譜方法可同時測定血漿中的可的松和皮質(zhì)醇兩種物質(zhì),分離效果令人滿意。進行生物樣本預(yù)處理時引入雜質(zhì)少、回收率高是SPE的優(yōu)點之一。
3、測定血漿中的抗癲癇藥物時,采取了固相萃取的預(yù)處理方法,較之傳統(tǒng)的液一液萃取方法簡單,用時少:比較同一血漿經(jīng)兩種方法提取后的含量測定色譜圖,可見SPE的樣品雜質(zhì)明顯減少,因此可減輕對色譜柱的污染,延長其使用壽命。
SPE技術(shù)的出現(xiàn)使生物樣本處理過程大為簡化,自動化SPE的使用真正實現(xiàn)了生物樣本的在線分析,以其高效、高選擇性、高度自動化的特點廣泛用于體內(nèi)藥物分析中各種生樣品的分離和純化。但是, 廣東SPE小柱公司彪仕奇認為應(yīng)該看到的是,固相萃取技術(shù)在使萃取劑更具有選擇性和通用性方面仍然存在一定差距,自動化的預(yù)處理技術(shù)的應(yīng)用還不夠廣泛,應(yīng)該進一步研究。隨著這項技術(shù)的逐漸成熟,在體內(nèi)藥物分析樣本處理中所處的地位會越來越要。
