天津色譜級(jí)試劑：薄層色譜小知識(shí)
天津色譜級(jí)試劑彪仕奇收集總結(jié)了幾點(diǎn)薄層色譜小知識(shí)，供大家參考
1、怎樣提高點(diǎn)樣效率？
點(diǎn)樣是造成TLC定量誤差的主要來源。定量毛細(xì)管更適合較小體積的點(diǎn)樣；微量注射器更適合較大體積的點(diǎn)樣。這主要是因?yàn)槲⒘孔⑸淦魇苄馀?、溶液回爬現(xiàn)象的影響較大。為避免不同定量毛細(xì)管理體制的占樣誤差，建議一塊薄層板上最好用同一只定量毛細(xì)管。但應(yīng)注意更換樣品時(shí)，應(yīng)將毛細(xì)管用超聲波或不同極性溶課劑清洗干凈。在制備樣品時(shí)，溶樣溶劑黏度不能過高，以便于點(diǎn)樣；溶劑沸點(diǎn)過低則進(jìn)樣體積易變，過高則會(huì)改變展開劑組成；對(duì)樣品溶解度過高會(huì)使樣點(diǎn)發(fā)生空心現(xiàn)象，常用的溶劑為甲醇、乙醇、丙酮。經(jīng)典TLC樣點(diǎn)原點(diǎn)一般為直徑3mm點(diǎn)間距離1-2cm底邊距離1.5cm;HPLC樣點(diǎn)原點(diǎn)一般為直徑1mm點(diǎn)間距5mm底邊距1cm。
2、展開劑的選擇
TLC與HPLC相比，一個(gè)突出的優(yōu)點(diǎn)就是流動(dòng)相的選擇具有更大的靈活性，流動(dòng)相的選擇的目的是使絕大部分樣品的Rf值位于0.1－0.7之間并達(dá)到較好的分離，與此對(duì)應(yīng)的是流動(dòng)相要有適當(dāng)?shù)膹?qiáng)度和組成。流動(dòng)相強(qiáng)度越大，溶質(zhì)Rf值越大，但很可能降低分離能力；另外單一溶劑很難分離較復(fù)雜的混合物、根據(jù)相似相溶原理，要使用多元溶劑體系。一般展開劑體系選擇如下：根據(jù)分離樣品性質(zhì)、薄層色譜板性質(zhì)選擇一個(gè)二元溶劑體系，通過調(diào)節(jié)溶劑比例以尋求適合Rf值，適合的Rf值找到后，再尋求極性參數(shù)相同的二元溶劑體系兩個(gè)，以這三個(gè)組成為三點(diǎn)組成一個(gè)三角形，則可看到：三角形頂點(diǎn)是二元體系，邊是三元體系，三角形內(nèi)是四元體系，并且極性一致，可根據(jù)幾何原理得出任一點(diǎn)組成，這種方法較為直觀，也較簡(jiǎn)單。理想的顯色希望靈敏度高，斑點(diǎn)顏色穩(wěn)定、斑點(diǎn)與背景間的對(duì)比度好，斑點(diǎn)的大小及顏色的深度與物質(zhì)的量成正比，在樣品組成并不完全已知的情況下，通用顯色方法顯得尤為重要，
通用顯色方法主要有：
1、紫外照射法：方便、不破壞樣品；
2、碘蒸氣法：通用性強(qiáng)，與紫外法結(jié)合靈敏度高于該兩法單獨(dú)使用；
3、熒光試劑：制造熒光背景，使原來紫外下無熒光物質(zhì)被鑒別，有熒光物質(zhì)更明顯；
3、展開劑選擇的大概原則
選擇展開劑一般要用混合溶劑：一般要有一種對(duì)所要展開樣品溶解度較大的溶劑，視樣品的極性，再選用相應(yīng)的體系 。極性小的用乙酸乙酯：石油醚系統(tǒng)極性較大的用甲醇：氯仿系統(tǒng)極性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系統(tǒng)拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸
關(guān)于展開劑：分離的樣品酸性比較大，一般在展開劑中加酸加甲酸是因?yàn)樵摌悠肥撬嵝缘?，加酸的量和該物質(zhì)的酸性成正比關(guān)系，加水可能是因?yàn)槟愕臉悠肥擒疹惖挠盟崴鲆幌戮彌_，目的就是讓斑點(diǎn)圓滑，不脫尾，展距良好。
飽和也非常重要，邊緣效應(yīng)很嚴(yán)重的不妨用下端浸在展開劑中的濾紙貼在展開缸的內(nèi)壁，這樣飽和效果會(huì)好一些
1)在層析缸口涂適量凡士林，增加密封性；
2)以展開劑邊緣效應(yīng)的大小，確定展開劑平衡時(shí)間的長(zhǎng)短，一般平衡時(shí)間在30分鐘即可。
有機(jī)溶劑的極性，甲醇>氯仿，因此在氯仿：甲醇：氨水（10:1:0.6）這個(gè)展開劑中，如果極性略大，可適當(dāng)降低甲醇比例；如極性太小，可適當(dāng)增大甲醇比例。
另外還有一個(gè)問題，這個(gè)展開劑中，甲醇用量較小，而甲醇又易揮發(fā)，容易產(chǎn)生邊緣效應(yīng)，要特別注意展開劑的平衡和層析缸的密封。不同的展開系統(tǒng)意思是其中至少應(yīng)該有一種溶劑不同（最好是不同分類組的溶劑），而不是比例不同。或者使用不同的固定相。
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