遼寧甲醇生產(chǎn)廠家：高效液相色譜的系統(tǒng)組成（一）
高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）是色譜法的一個(gè)重要分支，應(yīng)用范圍十分廣泛，對樣品的適用性廣，不受分析對象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，幾乎所有的化合物包括高沸點(diǎn)、極性、離子型化合物和大分子物質(zhì)均可用高效液相色譜法分析測定，因而彌補(bǔ)了氣相色譜法的不足。在目前已知的有機(jī)化合物中，可用氣相色譜分析的約占20%，而80%則需用高效液相色譜來分析。HPLC具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度好、能分析和分離高沸點(diǎn)且不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的特點(diǎn)，已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)應(yīng)用。接下來遼寧甲醇生產(chǎn)廠家彪仕奇帶您來了解高效液相色譜法。
基本原理
色譜法的分離原理是：溶于流動(dòng)相(mobilephase)中的各組分經(jīng)過固定相時(shí)，由于與固定相(stationphase)發(fā)生作用(吸附、分配、排阻、親和)的大小、強(qiáng)弱不同，在固定相中滯留時(shí)間不同，從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。
高效液相色譜法以經(jīng)典的液相色譜為基礎(chǔ)，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有顆粒極細(xì)的高效固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測，從而實(shí)現(xiàn)對試樣的分析。
系統(tǒng)組成
HPLC系統(tǒng)一般由輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、數(shù)據(jù)記錄及處理裝置等組成。其中輸液泵、色譜柱、檢測器是關(guān)鍵部件。此外，還可根據(jù)需要配置梯度洗脫裝置、在線脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、預(yù)柱或保護(hù)柱、柱溫控制器等，現(xiàn)代HPLC儀還有微機(jī)控制系統(tǒng)，進(jìn)行自動(dòng)化儀器控制和數(shù)據(jù)處理。制備型HPLC 儀還備有自動(dòng)餾分收集裝置。
1、輸液系統(tǒng)
輸液系統(tǒng)輸液泵是HPLC系統(tǒng)中最重要的部件之一。輸液泵按照輸出液恒定的因素分為恒壓泵和恒流泵，泵的性能好壞直接影響到整個(gè)系統(tǒng)的質(zhì)量和分析結(jié)果的可靠性。
輸液泵按工作方式分為氣動(dòng)泵和機(jī)械泵兩大類。機(jī)械泵中又有螺旋傳動(dòng)注射泵、單活塞往復(fù)泵、雙活塞往復(fù)泵和往復(fù)式隔膜泵。
HPLC使用的輸液泵應(yīng)滿足下列條件：
①流量穩(wěn)定，其RSD應(yīng)＜0.5%，這對定性定量的準(zhǔn)確性至關(guān)重要；
②流量范圍寬，分析型應(yīng)在0.1~10ml/min 范圍內(nèi)連續(xù)可調(diào)，制備型應(yīng)能達(dá)到100 ml/min；
③輸出壓力高，一般應(yīng)能達(dá)到150~300kg/cm2；
④液缸容積小；
⑤密封性能好，耐腐蝕。
（1）往復(fù)式柱塞泵活塞向外移動(dòng)時(shí)，泵頭出口單向閥關(guān)閉，同時(shí)流動(dòng)相進(jìn)入的入口單向閥打開，溶液（流動(dòng)相）抽入活塞缸。當(dāng)柱塞推入缸體時(shí)，入口單向閥關(guān)閉，出口單向閥打開，流動(dòng)相被壓出活塞缸，流向色譜柱。雙活塞往復(fù)泵的輸液流量比單活塞泵小得多。其優(yōu)點(diǎn)是不必使用消除脈沖的阻尼器，避免了阻尼器的壓力消耗，但缺點(diǎn)是設(shè)備成本較高，流量調(diào)節(jié)也比單活塞泵復(fù)雜。往復(fù)式柱塞泵的特點(diǎn)是不受整個(gè)色譜體系中其余部分阻力稍有變化的影響，連續(xù)供給恒定體積的流動(dòng)相。
（2）隔膜型往復(fù)泵隔膜型往復(fù)泵也是一種恒流泵，活塞與油接觸，當(dāng)活塞往復(fù)運(yùn)動(dòng)時(shí)，隔膜受到油壓的作用，對流動(dòng)相部分產(chǎn)生“吸引”或“推壓”，使流動(dòng)相部分的單向閥吸液或排液，從而獲得穩(wěn)定的液流。隔膜泵的活塞不直接與流動(dòng)相接觸，故不存在活塞密封墊磨損對流動(dòng)相的污染。隔膜泵的死體積小（約0.1mL），因此，更換流動(dòng)相后平衡快，有利于梯度洗脫。但隔膜泵結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，價(jià)格較貴。
（3）氣動(dòng)放大泵氣動(dòng)放大泵是一種恒壓泵。泵頭通常由兩部分組成--單向閥和密封圈-柱塞桿。單向閥一般由閥體\塑料\或陶瓷閥座和紅寶石球組成，在壓力的作用下寶石球離開閥座，流動(dòng)相流過單向閥；反之，在反向力的作用下，寶石球回到閥座上，此時(shí)流動(dòng)相不再流過單向閥。
2、脫氣裝置
流動(dòng)相溶液往往因溶解有氧氣或混入了空氣而形成氣泡。氣泡進(jìn)入檢測器后會(huì)在色譜圖上出現(xiàn)尖銳的噪音峰。小氣泡慢慢聚集后會(huì)變成大氣泡，大氣泡進(jìn)入流路或色譜柱中會(huì)使流動(dòng)相的流速變慢或出現(xiàn)流速不穩(wěn)定，致使基線起伏。氣泡一旦進(jìn)入色譜柱，排出這些氣泡則很費(fèi)時(shí)間。在熒光檢測中,溶解氧還會(huì)使熒光淬滅。溶解氣體還可能引起某些樣品的氧化或使溶液pH值發(fā)生變化。
目前，液相色譜流動(dòng)相脫氣使用較多的是離線超聲波振蕩脫氣、在線惰性氣體鼓泡吹掃脫氣和在線真空脫氣。
超聲波振蕩脫氣：將配制好的流動(dòng)相連容器放入超聲水槽中脫氣10-20min。這種方法比較簡便，又基本上能滿足日常分析操作的要求，所以，目前仍廣泛采用。
惰性氣體鼓泡吹掃脫氣：將氣源（鋼瓶）中的氣體（氦氣）緩慢而均勻地通入儲(chǔ)液罐中的流動(dòng)相中，氦氣分子將其它氣體分子置換和頂替出去，而它本身在溶劑中的溶解度又很小，微量氦氣所形成的小氣泡對檢測無影響。
真空脫氣裝置：將流動(dòng)相通過一段由多孔性合成樹脂膜制造的輸液管，該輸液管外有真空容器，真空泵工作時(shí)，膜外側(cè)被減壓，分子量小的氧氣、氮?dú)狻⒍趸季蜁?huì)從膜內(nèi)進(jìn)入膜外而被脫除。
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